일반적인 DNA, RNA 및 비천연 핵산 합성에서는 Deprotection 및 Coupling 단계가 중요한 역할을 합니다.
탈보호 단계는 고체 지지체의 DMT 그룹이나 이전 뉴클레오사이드의 5' 하이드록실 그룹을 유기산으로 제거하고, 다음 커플링 단계를 위해 하이드록실 그룹을 노출시키는 단계입니다.디클로로메탄이나 톨루엔에 들어 있는 3% 트리클로로아세트산은 대부분 탈보호 단계를 수행하는 데 사용됩니다.트리클로로아세트산의 농도와 탈보호 시간(디블로킹 시간)이 최종 제품의 순도를 좌우합니다.낮은 농도와 불충분한 디블로킹 시간은 반응하지 않은 DMT 그룹을 남겨두어 수율을 감소시키고 원치 않는 불순물을 증가시킵니다.디블로킹 시간이 길면 합성된 서열의 디퓨린이 발생하여 예상치 못한 불순물이 형성될 수 있습니다.
커플링 단계는 용매의 수분 함량과 공기 중 수분에 민감합니다.합성 시 물의 농도는 40ppm 미만, 25ppm 미만이어야 합니다.무수합성 조건을 유지하기 위해서는 낮은 습도의 환경에서 핵산 합성이 이루어져야 하므로, 고객님께는 다음의 사용을 권장해 드립니다.아미디테 용해 장비, 공기와의 접촉을 피하기 위해 분말 또는 유성 포스포라미다이트를 무수 아세토니트릴에 용해시킬 수 있습니다.
포스포르아미다이트의 용해는 물이 없는 상황에서 더 좋으며 분자 트랩은 시약과 아미다이트의 미량 수분을 흡착하기 때문에 준비가 필요합니다.분자 트랩.50-250ml 시약병에는 2g, 250-500ml 시약병에는 5g, 500-1000ml 시약병에는 10g, 1000-2000ml 시약병에는 20g을 권장합니다.
포스포라미디트의 용해는 불활성 분위기에서 수행되어야 하며 활성화제 시약과 아세토니트릴의 교체는 제 시간에 완료되어야 합니다.캡핑 및 산화 시약은 가능한 한 빨리 사용해야 하며 개봉된 시약은 유통기한이 짧고 합성 중 활성이 떨어집니다.
게시 시간: 2022년 8월 9일