화학적 DNA 합성은 고체상 합성 전략과 포스포라미다이트 화학을 기반으로 합니다.생물학적 DNA 합성과 달리 화학적 DNA 합성의 재료는 그림 1과 같이 DMT(4,4-dimethoxytrityl)와 Phosphoramidite 변형된 deoxyriboxyside입니다. DNA 합성은 고체 지지대 위에서 수행됩니다(당사는 다양한 제품을 제공할 수 있습니다).올리고 합성 컬럼), 즉 CPG(제어된 기공 유리) 및 PS(폴리스티렌)이며, 전체 합성은DNA/RNA 합성기당사의 주요 장비인 는 HY Single Channel Synthesizer, HY-12, HY-192 등과 같은 모델이 있으며 합성 방향은 3'에서 5'이며 하나의 경로를 통해 뉴클레오티드가 고체 지지체에 도입됩니다. 합성주기.일반적으로 합성 사이클에는 탈보호, 커플링, 캡핑 및 산화의 4단계가 포함됩니다(그림 2).탈보호는 고체 지지체의 DMT 그룹 또는 이전 뉴클레오사이드의 5' 하이드록실 그룹을 제거하도록 설정되며 디클로로메탄의 3% 트리클로로아세트산이 탈보호 시약으로 사용됩니다.그런 다음 포스포르아미다이트 변형된 데옥시리복시사이드를 활성화제, 즉 5-에틸티오테트라졸 또는 4,5-디시아노이미다졸의 도움으로 수산기에 노출시켜 포스파이트트리에스테르(III)를 형성하고 커플링 단계를 실현했습니다.캡핑 단계는 커플링 단계 중에 반응하지 않은 수산기를 차단하여 원하지 않는 결함 시퀀스의 형성을 최소화하기 위해 수행됩니다.마지막으로, 불안정한 포스피트트리에스테르(III)는 피리딘 존재에서 산화제로서 요오드를 사용하여 화학적으로 안정한 포스포트리에스테르(V)로 산화됩니다.
합성된 DNA는 아미노분해에 의해 고체 지지체로부터 절단될 수 있으며, 포스포트리에스테르의 2-시아노에틸 보호 그룹과 핵염기의 아미드는 동시에 절단되며, 랙의 합성 플레이트와 합성 컬럼은 반응 챔버에 직접 배치됩니다. ~의탈보호 장비.조악한 DNA는 필요에 따라 HPLC, 전기영동 및 OPC로 준비할 수 있으며,정화 장비후처리용.
그림 1. dA의 화학 구조Bz포스포르아미다이트.
그림 2. 화학적 DNA 합성 메커니즘.
게시 시간: 2022년 8월 9일